タンパク質加水分解

自然界で発見されるタンパク質のサイズは5kDaから400kDaまで多様です。タンパク質の加水分解プロセスはタンパク質をより短い断片、すなわちペプチドに切断し、タンパク質の加水分解はペプチド質量分析による識別分析の前に重要なステップであり、タンパク質識別と特性評価、生物マーカーの発見成功の基盤です。質量分析は完全なタンパク質を研究することができますが、小さなペプチドはタンパク質の識別が容易です。また、タンパク質のカバレッジ率を向上させることができ、溶解性と異質性によりタンパク質のカバレッジ率が低下する可能性があります。そのため、最も一般的なプロテオミクスの方法は、部位特異的酵素切断部位を利用して小さなペプチド断片を生成することがよくあります。小さなペプチド断片は、高効率液体クロマトグラフィー（HPLC）やHPLCカップリング質量分析によって分離および特性評価が容易です。

バイタイパークの質量分析に基づくタンパク質識別例

BTP-タンパク質加水分解サービス

バイタイパークバイオテクノロジーは、タンパク質の加水分解方法を2つ提供しています：（1）ゲル内加水分解（ポリアクリルアミドゲルマトリックス内のタンパク質の加水分解）；（2）溶液内加水分解（タンパク質をクロロホルム/メタノールで沈殿させ、尿素で再溶解後に行う）。1次元または2次元ゲル電気泳動で分離されたタンパク質は、ゲル内で直接加水分解することができます。ゲル内加水分解は効果的で再現性が良いですが、比較的手間がかかり時間がかかります。ゲル内加水分解と比較して、溶液内加水分解は手間が少なく、所要時間が短いですが、溶液内加水分解したタンパク質の再溶解度が低く、一定のサンプル損失を招く可能性があります。

タンパク質加水分解のプロセス

バイタイパークバイオテクノロジーは、ゲル内加水分解と溶液内加水分解の両方のタンパク質加水分解関連サービスを提供しています。タンパク質加水分解の作業プロセスは以下の通りです：

1. 裂解液の調製；
2. 溶液内またはゲル内での酵素切断；
3. 尿素やグアニジンなどの溶液でタンパク質を変性；
4. DTTを使用してジスルフィド結合を還元；
5. ヨウ化エタン酸またはヨウ化エタノールアミドを使用してシステインをアルキル化；
6. 試薬の除去とバッファーの交換；
7. 適切なpHと温度でトリプシンまたは他のプロテアーゼを使用して、炭酸水素アンモニアバッファーで約18時間変性；
8. 酵素切断を酸で停止。
9. タンパク質の濃縮/洗浄。

タンパク質加水分解の作業プロセス

サンプルの要件
バイタイパークバイオテクノロジーは、以下のような様々なタイプのサンプルを処理可能です：

天然由来のタンパク質；
再組み換え由来の融合タンパク質およびタグ付きタンパク質；
異なるサブタイプの抗体；
膜タンパク質およびその他。

タンパク質酵素切断のメリット

• 柔軟性：ゲル内および溶液内加水分解の2つのタンパク質加水分解戦略を提供しています；
• 高い正確性とカバレッジ範囲：当社の加水分解サービスは質量分析の正確性とカバレッジ範囲を大幅に向上させることができます。
• 広範な応用：タンパク質の識別と特性評価を促進し、疾病のバイオマーカーの発見を支援し、生物学的プロセスの理解に貢献します。
• 完全なプロテオミクスサービス：プロテオミクス分析の全プロセスをカバーする完全なプロテオミクスサービスを提供し、加水分解後のサンプルを分析測定し、ワンストップで組織学の問題を解決します。

バイタイパークバイオテクノロジーは、高スループット自動化タンパク質加水分解サービスも提供しています。お気軽にお問い合わせください。