N-糖分析サービス

糖鎖化は、糖鎖をタンパク質、脂質、その他の有機分子に結合する酵素反応を指し、最も一般的なタンパク質翻訳後修飾（PTM）です。結合する糖鎖の複雑さと異性体の性質のため、糖鎖化解析は非常に困難です。モノクローナル抗体、糖タンパク質、ホルモン、サイトカイン、凝固因子などのタンパク質治療薬が臨床で使用されることが増えているため、タンパク質N-糖鎖化（N糖鎖とも呼ばれる）の検出がますます注目されています。

 

異なる生物において生成される異なるタイプのN糖鎖

N糖鎖（N-Glycan）は、Man3-GlcNAc2を含むオリゴ糖構造であり、末端のN-アセチルグルコサミン（GlcNAc）とアスパラギンのNH2基との間のグリコシド結合を介してタンパク質のポリペプチド鎖に結合します。ほとんどの糖鎖解析のサンプル調製ステップには、糖タンパク質の消化、脱糖鎖化、精製、標識/誘導化、SPEが含まれます。サンプルの特性に応じて、他のステップや技術を使用してサンプル調製を行うこともできます。

 

抗体を例にしたN糖鎖解析の一般的なフロー

MALDI TOF MSおよび/またはUHPLC技術を利用して、糖鎖とその種類を解析できます。

MALDI-TOF MS技術に基づくN糖鎖解析

MALDI-TOFは、糖鎖化化合物の構造特性に対して非常に高い感度を持ち、高スループット検出を実現できます。混合物N糖を解析する際、MALDIは単電荷イオンの形成を通じてサンプルを解析し、エレクトロスプレーイオン化による解析を行いません。N-糖鎖酵素AまたはF酵素反応を使用してサンプルのN糖鎖を解放し、サンプルをメチル化した後に検出を行います。

 

質量分析に基づくN糖鎖解析

 

HILIC-UHPLC MS技術に基づくN糖鎖プロファイリング（N-Glycan profiling）解析

LC-MSに基づくN糖解析は現在の主流解析方法であり、親水性相互作用クロマトグラフィー法（HILIC）はN糖解析に利用できます。PNGase F酵素反応で解放されたN糖を、2-アミノベンゾアミド（2-AB）で誘導化し、誘導化後の糖鎖を測定することで、大量のサンプルのN糖解析に利用できます。蛍光標識を行う前に、誘導化反応を妨げる可能性のある洗剤、非揮発性塩、遊離アミノを持つ物質が大量に存在する場合、TSK Amide-80カラムを使用してN糖を精製します。標識後のN糖はHILIC-UHPLC MSで解析されます。

 

HILICカラムを用いたN糖鎖解析の一般的なフロー

バイオテックパークは糖組学分野で長年の解析サービス経験を持ち、あなたの具体的なニーズに合わせて糖組学解析サービスをカスタマイズできます。ぜひご相談ください！

中/英語プロジェクト報告書

技術報告書では、バイオテックパークが詳細な中英文の技術報告書を提供します。報告書には以下が含まれます：

1. 実験手順（中英文）
2. 関連する質量分析パラメーター（中英文）
3. 質量分析画像
4. 元データ
5. N糖解析結果

N糖解析ワンストップサービス

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