糖谱検査

糖鎖化はタンパク質の重要な翻訳後修飾の一つです。糖鎖とペプチド鎖の結合様式の違いにより、タンパク質の糖鎖化はN-糖鎖化とO-糖鎖化に分けられます。N-糖鎖化は糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミン（Glc-NAc）とペプチド鎖の一部のAsn側鎖アミド基の窒素原子が結合することによります。糖鎖を接続できるAsnは、Asn-X-Ser/Thrの3残基からなるモチーフ中に存在する必要があり、XはProを除く任意のアミノ酸残基であることができます。O-糖鎖化の構造はN-糖鎖化よりも簡単で、一般に糖鎖は短いですが、種類はN-糖鎖化よりも多くなります。ペプチド鎖中で糖鎖化されるのは主にSerとThrであり、さらにチロシン、ヒドロキシリジン、ヒドロキシプロリンも含まれ、結合位置はこれらの残基側鎖のヒドロキシ基酸素原子です。百泰派克バイオテクノロジーは、高分解能質量分析装置Obitrap Fusion Lumosを基に、ほぼすべての糖型を含むByonicソフトウェアを利用してペプチド、タンパク質、抗体薬物の糖鎖化分析を行い、ペプチドまたはタンパク質サンプルの糖鎖化部位、N糖/O糖タイプ、糖鎖化部位の糖組成を特定することができます。

 

糖鎖分析と分類

 

ケーススタディ：

サービスケースとして、ある顧客が提供した再組換えタンパク質薬物に対する糖鎖プロファイル分析を行いました。顧客が提供した理論的な配列を受け取った後、まず配列を分析してプロジェクトに適したプロテアーゼを確認しました。通常は、ペプチドカバー率を向上させるために2種類以上のプロテアーゼを選択して酵素切断を行います。異なるプロテアーゼを使用して酵素切断を行い、異なるペプチド配列を生成し、ペプチド配列間の相互補完関係を利用して糖鎖プロファイル分析のペプチドカバー率を向上させます。以下は以前のプロジェクトの一部の実験データで、顧客が提供した再組換えタンパク質サンプルに対し、適切なプロテアーゼの組み合わせを選択した後のペプチドカバー率は以下の図の通りです。

 

 

このプロジェクトでは、理論的な配列と比較してペプチドカバー率は94％であり、未同定の6％の配列はシグナルペプチドであり、再組換えタンパク質の分泌過程で切断されているため、実際のペプチドカバー率は100％です。

Byonicソフトウェアを用いた分析後に同定された糖ペプチド関連のまとめは以下の通りです。

 

プロジェクトの最終報告書では、同定された各糖ペプチドの二次質量スペクトル情報も提供されます。以下に示す図の通りです。

中/英語プロジェクトレポート

技術レポートでは、百泰派克は詳細な中英語バイリンガル技術レポートを提供します。レポートには以下が含まれます：

1. 実験手順（中英語）
2. 関連する質量分析パラメータ（中英語）
3. 質量分析画像
4. 生データ
5. 糖鎖プロファイル分析結果

バイオ薬糖鎖プロファイル分析ワンストップサービス

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