ハイスループット遺伝子ノックアウトサービス
哺乳類の遺伝子を"ノックアウト"することは、遺伝子の機能や薬剤ターゲットとしての可能性を研究するための重要な方法です。これはアルツハイマー病、癌、心血管疾患、炎症、代謝疾患などの神経変性疾患の研究で広く利用されています。CRISPR/Cas9は、遺伝子配列を正確に修正できる革命的な遺伝子編集技術です。CRISPRは細菌や古細菌に存在する免疫システムで、侵入するウイルスのゲノムを認識し切断します。Cas9タンパク質と対応するガイドRNAを導入することで、CRISPR/Cas9技術は特定のDNA配列を精密にターゲティングして切断し、遺伝子ノックアウト、点変異、遺伝子挿入を実現します。CRISPR/Cas9による遺伝子編集は臨床応用の巨大な可能性を持ち、この技術が成熟するにつれ、薬剤ターゲットの発見と検証、遺伝子機能の研究、遺伝子治療、癌免疫療法などの分野でますます重要な役割を果たしています。

Neil, C.; et al. ACS Synthetic Biology. 2022.
CRISPR/Cas9遺伝子ノックアウト技術
基礎研究や医薬品研究開発のニーズを満たすために、研究分野では一連のターゲット遺伝子/全ゲノムノックアウト細胞を緊急に取得する必要があります。BTP(バイオテクノロジー・パーク)は、最適化されたCRISPR/Cas9システムを使用して、高スループット遺伝子ノックアウトサービスを提供します。当社のヒト全ゲノムノックアウトアレイライブラリは完全なヒトゲノムをカバーしており、全ゲノムアレイノックアウトライブラリはすべてのヒト初代細胞で高含量スクリーニングの検証を完了し、80%以上のターゲットで70%以上のノックアウト効率を達成しています。
BTPは、ウイルスパッケージング、プラスミド準備、Cas9濃度テストなど、最も簡単で使いやすい高スループットCRISPR遺伝子ノックアウトサービスを提供し、どの細胞をノックアウトするか、ノックアウトできるかどうか、どのようにノックアウトするか、ノックアウト効率はどうかといった重要な問題を解決します。単一/複数遺伝子ノックアウト、フレームシフト変異、大規模配列削除を行うことができます。お客様は遺伝子名とターゲット細胞を提供するだけで、BTPがすべてのプロジェクトの後続作業を担当し、プロジェクト評価(ターゲット遺伝子がターゲット細胞で発現しているか、必須遺伝子かどうか)、ノックアウト実験、ノックアウト細胞の検証、凍結保存ノックアウト細胞と生きたノックアウト細胞の納品を行います。
サービスの利点
1.サンプル適用性が高い
人、マウスの細胞系、初代細胞、免疫細胞、iPS細胞などに適用可能。
2.遺伝子の必要性と発現量の分析
遺伝子ノックアウト実験を行う前に、生物情報学とプロテオミクスデータに基づいて、異なる細胞における遺伝子の必要性と発現量を分析し、実験の実行可能性を確保し、実験リスクを低減します。
3.gRNAの設計と検証が不要
人類全ゲノムgRNAのすべての検証を完了し、薬物関連のターゲットもPCRシーケンシング検証を完了しています。顧客のターゲットに対して予備実験を行いgRNAを検証する必要がなく、プロジェクト期間を大幅に短縮します。
4.高スループット高効率
最適化されたCRISPR/Cas9システムを使用して高スループット遺伝子ノックアウトを行い、複数のsgRNA/ターゲット遺伝子設計により高いノックアウト効率を保証します。80%以上のターゲットノックアウト効率が70%以上に達し、短期間(10日以内)で高ノックアウト効率のKOプールを提供し、大多数の応用シーンに対応します。
5.ノックアウト効率の二重検証
遺伝子ノックアウト後、WB実験で抗体ノックアウト検証の第一選択法であるSangerシーケンシングと深層プロテオミクス技術を使用してノックアウト効率を二重に検証し、データの信憑性を二重に保証します。
応用事例
1.遺伝子治療

Dever DP, et al. Nature. 2016.
2.免疫細胞工学

Roth TL, et al. Nature. 2018.
3.遺伝子機能研究

Gordon DE, et al. Science. 2020.
4.薬物ターゲットスクリーニング

Morgens DW, et al. Nat Biotechnol. 2016.
一般的な質問:
質問1.高スループット遺伝子ノックアウト技術は従来の遺伝子ノックアウト技術と比べてどのような利点がありますか?
回答:高スループット遺伝子ノックアウト技術は、従来の遺伝子ノックアウト技術と比べて以下の利点があります。
1)編集スループット
- 従来の遺伝子ノックアウト技術:スループットが低く、通常2-3ヶ月で数十のノックアウト細胞系の構築を完了します。
- 高スループット遺伝子ノックアウト技術:スループットが高く、通常1-2ヶ月で数百のノックアウト細胞系の構築を完了します。
2)編集効率
- 従来の遺伝子ノックアウト技術:ノックアウト効率は30-90%で、不均一です。
- 高スループット遺伝子ノックアウト技術:ノックアウト効率が非常に高く、70-100%に達します。
3)KO細胞のストック
- 従来の遺伝子ノックアウト技術:KO細胞のストックは3000+以下です。
- 高スループット遺伝子ノックアウト技術:人類全ゲノムをカバーし、KO細胞のストックは19000+に達します。
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