ペプチドカバレッジ率/ペプチドマップ分析

タンパク質サンプルの同定プロセスでは通常、トリプシンのみを使用してタンパク質を酵素分解し、同定されたペプチド断片のカバレッジ率は約60％です。ターゲットタンパク質の完全な配列情報を得るために、Biotage社はタンパク質同定プロセスで一般的に使用される6種類のタンパク質酵素（トリプシン、キモトリプシン、Asp-N、Glu-C、Lys-C、Lys-N）を選び、ターゲットタンパク質を個別に酵素分解および同定します。より多くの断片化ペプチドを得ると同時に、ペプチドフラグメント間の連結によりタンパク質配列の100%の決定を実現します。Biotage社は既存の質量分析技術プラットフォームを利用して、LC-MS/MSを基盤としたペプチドマップ分析を提供します。この分析は、組換えタンパク質が完全に発現したかどうかを確認し、組換えタンパク質の発現プロセス中に断裂が発生したかどうかを検出するために使用されます。主にタンパク質の一次構造の確認に使用され、多様なタンパク質酵素分解反応と液体クロマトグラフィー質量分析技術を用いてペプチドのシーケンシングを行い、専用の分析ソフトウェアと組み合わせて、任意の非特異的タンパク質酵素分解生成物の質量分析データを解析します。これにより、測定されたターゲットタンパク質配列の100%のカバレッジを実現します。

質量分析法によるペプチドカバレッジ率/ペプチドマップ全配列決定のプロセス：

• まず、6種類のタンパク質酵素（トリプシン、キモトリプシン、Asp-N、Glu-C、Lys-C、Lys-N）を使用してターゲットタンパク質を個別に酵素分解および同定します
• 次にnano LC-MS/MSまたはUV LC-MS/MSを使用してサンプルを分析します
• 得られたペプチドカバレッジ率/ペプチドマップ全配列を提供された理論配列と比較します
• 比較結果を得る

質量分析法によるペプチドカバレッジ率/ペプチドマップ全配列決定の利点：

（1）特異的および非特異的タンパク質酵素の組み合わせにより、任意のタンパク質（ペプチド）の同定が100%のカバレッジに達することができます。

（2）各ペプチド断片の確認には、1）サンプルの質量に基づくもの、2）サンプルのMS/MSフィンガープリントマップに基づくものが含まれるため、一次質量分析のみを使用した測定よりも正確です。

サンプル要件：

ゲル内サンプルと溶液サンプルの両方が上述のシーケンシングに使用できます
サンプルの純度は高いほど良く、80%以上のタンパク質を推奨します
必要なターゲットタンパク質サンプル量：10-20μg
タンパク質ゲルサンプルもペプチドカバレッジ率測定に使用できますが、サンプルの特別な前処理が必要です。

ケーススタディ：

タンパク質サンプルの100%配列検証サービス
実際の実験プロセスでは、効率を高め費用を抑える原則に従い、まず提供された理論配列を分析します。分析プロセスは、いくつかの異なるタンパク質酵素の酵素切断部位に従ってペプチドカバレッジ率を予測します。もし3種類のタンパク質酵素の酵素切断のみで100%の全配列をカバーできる場合、実際の実験プロセスではまずこれら3種類のタンパク質酵素を使用して酵素分解および後続の配列分析実験を行います。これにより、実験コストを効果的に削減できます。以下は以前のプロジェクトの一部データです。このプロジェクトでは、クライアントは理論配列に従って抗体薬を発現し、一次配列を検証する必要があり、発現された抗体が理論配列と一致することを証明する必要があります。以下に一部の実験データを示します：

最終報告書では、以下の図のようにペプチドカバレッジ率の詳細データを示します。

中/英語プロジェクト報告書

技術報告書では、Biotage社は詳細な中英二言語版技術報告書を提供します。報告書には以下が含まれます：

1. 実験手順（中英）
2. 関連する質量分析パラメータ（中英）
3. 質量分析画像
4. 生データ
5. バイオ医薬品ペプチドカバレッジ情報

バイオ医薬品ペプチドカバレッジ測定ワンストップサービス

注文-サンプル送付のみ
Biotage社のワンストップサービス：サンプル処理-機器分析-データ分析-プロジェクト報告