SDS-PAGEタンパク質純度分析

ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（英語：sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis、略称SDS-PAGE）は、一般的に使用されるタンパク質の純化分析技術です。SDS-PAGEは、異なるタンパク質分子が持つ電荷の差異や分子サイズの違いによって生じる異なる移動率に基づいてタンパク質を分離します。タンパク質サンプルに複数のタンパク質や、純化されたタンパク質サンプルに他の雑タンパク質が含まれている場合、SDS-PAGEによって異なるタンパク質が複数のタンパク質バンドに分離されます。純化されたサンプルに同じタンパク質のみが含まれている場合、電気泳動後にタンパク質サンプルは1つのタンパク質バンドのみを示します。このようにして、SDS-PAGE技術はタンパク質サンプルの純度を分析することができます。

SDS-PAGE分析原理

SDSは、陰イオン界面活性剤であり、タンパク質の水素結合や疎水結合を断ち切り、一定の割合でタンパク質分子と結びつき、タンパク質が持つ負電荷の量をその元の電荷よりもはるかに増加させ、タンパク質間の天然の電荷差を隠します。その結果、各タンパク質-SDS複合体の電気泳動時の移動速度はタンパク質分子量によってのみ決定され、異なるタンパク質は分子量の差によりSDS-PAGE電気泳動後に分離され、タンパク質染色により分離結果を分析します。

タンパク質SDS-PAGE分析フロー

1. タンパク質濃度測定
2. サンプル処理: タンパク質サンプルに等量のB-メルカプトエタノールを含む2xローディングバッファーを加え、沸騰させて10分間加熱します
3. 電気泳動準備: 適切な濃度のSDS分離ゲルを調整し、電気泳動槽を設置し、1x電気泳動液を注入します
4. タンパク質サンプルのロード:タンパク質濃度に基づいて、処理済みのタンパク質サンプルを適量取り、順に電気泳動ウェルに加え、さらに適量のタンパク質標準マーカーを他の空のウェルに加えます。
5. 電気泳動開始: 電源を接続し、電圧を120vに調整して一定電圧を維持します。
6. 電気泳動終了後のゲル剥離: ブロモフェノールブルーがゲルの底部に移動したら電気泳動を停止し、タンパク質ゲルを取り出し、濃縮ゲルと分離ゲルの底部のブロモフェノールブルーゲルストリップを切り取ります。
7. 染色: R250染色液を使用してタンパク質ゲルを1時間染色します
8. 脱色: 染色したタンパク質ゲルを脱色液で脱色し、背景がきれいになり、タンパク質バンドがはっきりと見えるようにします
9. 撮影分析

中/英語プロジェクトレポート

技術レポートでは、バイタパークは詳細な中英両言語版の技術レポートを提供します。レポートには以下が含まれます：

1. 実験手順（中英語）
2. 関連するSDS-PAGEパラメータ（中英語）
3. タンパク質純度結果