1D SDS-PAGEおよびIEFサービス

Baiteipaku生物技術は、SDS-PAGE、IEF、Native PAGE分析を含むワンストップのタンパク質ゲルサービス関連ソリューションを提供します。

1D SDS-PAGEサービス

ポリアクリルアミドゲル電気泳動（PAGE）は、DNA、RNA、およびタンパク質を含む大分子を分離するための最も一般的な技術の1つです。電気泳動は、電場を適用して帯電したイオンを移動させるプロセスです。この技術では、帯電分子の移動度はその正味電荷と通過する溶液の抵抗に比例します。ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）は陰イオン界面活性剤であり、溶解中に広範囲のpHで正味の負電荷を持ちます。ペプチド鎖はその相対分子量に比例して一定量のSDSと結合します。SDSの負電荷はタンパク質のほとんどの複雑な構造を破壊します。

 

1D SDS-PAGE

タンパク質混合物をゲルのサンプルウェルに追加すると、最大サイズのタンパク質がゲルに移動していない間に、最小サイズのタンパク質が既にゲルを通過している現象が発生する可能性があります。したがって、より良い分離効果を得るために、ゲルの特性を利用してゲルを濃縮ゲルと分離ゲルの2層に分ける方法がこの問題を解決します。PAGEゲルの底部は大きな分離ゲルで、上部は狭い濃縮ゲルです。電気泳動バッファーはpH 8.3のグリシンで作られ、濃縮ゲルのpH値は6.8、分離ゲルのpH値は8.8です。電気泳動中、電流は負電荷を持つ分子によって運ばれ、同じ方向に移動します。pH 8.3の条件下では約10％のグリシン分子のみが負電荷を持つため、ここでの電流は主に集積バッファー中のCl-によって運ばれます。Cl-イオンはタンパク質よりも先に集積ゲルの底部に集積します。このため、SDSで包まれたタンパク質分子は、上部のグリシン分子と下部のCl-の間に挟まれ、最初にロードされた体積よりもはるかに小さなバンドに濃縮されます。

電流の作用で移動すると、タンパク質は分離ゲルに移動します。この時、pH 8.8の分離ゲルバッファー中のグリシンは負電荷の分子となり、非常に高速で移動し、ほぼCl-イオンと一致します。タンパク質はその後に続きます。この時、タンパク質はCl-とグリシン陰イオンの移動軌跡を通じて分離ゲルに入り、電流を運びます。タンパク質は、類似した流体力学的性質を持つ棒状の負電荷高分子になり、その移動度は分子量にのみ依存します。

SDS-PAGEは広く応用されていますプロテオミクス分析、含むタンパク質分子量測定，タンパク質の識別、サンプルの純度分析、ジスルフィド結合の識別，タンパク質の定量など。

等電点電気泳動（IEF）分析サービス

等電点電気泳動（IEF）は、タンパク質の等電点（pI）に基づいてタンパク質を分離する電気泳動技術です。pI=pHの時、タンパク質の正味電荷は0であるため、タンパク質は電場で移動しません。IEFでは、タンパク質の分離は両性電解質混合物を含むポリアクリルアミドまたは寒天ゲルで行われ、両性電解質は電場で移動し、ゲル内にpHグラデーションを形成します。タンパク分子はpHグラデーションを持つ媒体で集中され、媒体を通じて電流が正電荷の酸化極と負電荷の還元極を生成します。帯電したタンパク質分子は、反対の電荷を持つ極に向かって移動し、周囲のpH値が等電点と一致する時にゲル内で移動を停止します。つまり、タンパク質の正味電荷が0の時です。

このようにして、同じ等電点を持つタンパク質は固定されたpHのバンドに集中します。各タンパク質はpHグラデーション内のそのpIに対応する位置にあります。IEF技術は非常に高い分解能を持ち、1つの電荷が異なるタンパク質でも異なるバンドに分けられます。

Baudin, B. Gel Electrophoresis - Principles and Basics. 2012.

等電点電気泳動（IEF）分析