膜タンパク質同定サービス

膜タンパク質（受容体やイオンチャネルなど）は細胞機能の重要な調節因子です。膜タンパク質は既知の医薬品ターゲットの3分の2を占めており、バイオ医薬品業界における膜タンパク質の重要性を示しています。

その中でも、Gタンパク質共役受容体（GPCR）は最大で、最も広く使用されている膜受容体タンパク質であり、最も重要な薬物受容体です。すべてのヒト薬物ターゲットの50％以上を占め、癌を含む多くの疾患の治療ターゲットとして使用されます。心血管、代謝、中枢神経系、炎症性疾患などが含まれます。

イオンチャネルは、もう一つの重要な膜タンパク質薬物ターゲット群を代表しており、現在上市されている薬剤の10％を占めています。それにもかかわらず、薬物開発のために十分な量の純粋で正しく折りたたまれた膜受容体を製造することは依然として大きな課題です。

Nan, L. et al. Lab on a chip. 2014.

膜タンパク質の同定

BTP-膜タンパク質同定サービス一般的な流れ：

1. 細胞質、周質、または細胞培養上清液から膜タンパク質を精製します。使用する発現宿主や発現ベクターに応じて、細胞質、（細菌の）周質、または細胞培養上清液からタンパク質を精製します。
2. 溶解度と純度を向上させるための緩衝液と洗剤のスクリーニング。可溶性タンパク質および膜タンパク質に対して、視差スキャン蛍光法（DSF）を使用して最適な安定性条件の緩衝液を決定します。適用可能な場合、確立された活性分析法を使用して安定性と活性状態を関連付けることができます。膜または膜付着タンパク質の場合、細菌または真核生物の膜からタンパク質を抽出する際に洗剤が必要です。洗剤の使用は、抽出および精製段階でタンパク質の安定性のために最適化する必要があります。タンパク質が包涵体として発現される場合、再溶解と再折りたたみが完了した後、最適な洗剤と緩衝液条件を最適化することができます。
3. His、Rho1D4、GST、またはstrepタグを使用したアフィニティ精製。高品質のアフィニティ精製基質を使用して、His、GST、またはStrepタグなどのタグと融合したタンパク質を精製できます。膜タンパク質の場合、Rho1D4システムの使用をお勧めしますが、必要に応じて他のタグを使用して精製することも可能です。弊社の精製条件は最適化されており、目的のタンパク質に応じてミリグラム単位での精製が可能です。サービスには、緩衝液および洗剤の最適化が含まれ、最適な安定性と活性を持つタンパク質を提供します。百泰派克生物は、SDS-PAGEやWestern Blotなどのデータを含むすべてのステップの詳細なドキュメントを提供します。

結晶化のための均一性タンパク質コンポーネントを準備するためのさらなる精製ステップ。たとえば、タンパク質結晶化実験や機能結合測定に適したタンパク質を得るために、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィーやゲルろ過を使用して第2または第3の精製ステップを行うことができます。