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プロテインゲルスポット、ゲルストリップ、IPサンプルのタンパク質同定

BaiTaiPakのバイオは、MALDI-TOF質量分析システムとLC-MS/MS質量分析システムを組み合わせて、専門的で正確なタンパク質スポット、バンド、IPサンプル、CO-IPサンプルのタンパク質同定サービスを提供します。同定可能なサンプルには、1D-SDS PAGEで分離されたタンパク質バンド、2DE PAGEのタンパク質スポット、タンパク質発現産物、免疫共沈(Co-IP)サンプルが含まれます。タンパク質サンプルの同定前処理プロセスは、Nature Methodsに発表された記事「Universal sample preparation method for proteome analysis」に厳密に従って行われ、同定試験でより高いペプチドカバレッジを得ることを保証します。質量分析の原理はショットガン法(Shot-gun)に基づいており、タンパク質バンドまたはタンパク質溶液を酵素でペプチド混合物に切断し、高効率液体クロマトグラフィーで分離して、より簡単な成分を得て、高分解能質量分析計で分析します。検索ソフトウェアは、二次質量分析情報と対応するデータベースを比較し、マッチングスコアとミスマッチフィルターを組み合わせることで、ペプチドの正確な配列が得られ、各タンパク質の完全な配列を組み立てることができ、タンパク質の同定を実現します。

タンパク質質量分析同定プロセス

鸟枪法(shot-gun)LC-MS的蛋白鉴定流程

ショットガン法(shot-gun)LC-MSに基づくタンパク質同定プロセス


サンプルについて

1D SDS PAGE/2D PAGEゲルサンプル:
1. Coomassie Blue、SYPRO RubyおよびSilver stainサンプルはすべてタンパク質の同定試験を行うことができます;
2. 銀染サンプルは後続の質量分析と互換性がない可能性があるため、以下の製品または実験手順を使用して銀染実験を行うことをお勧めします:
ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2)
Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)
3. 銀染サンプルは脱色処理を行わないでください

液体サンプル(In solution format):
1. サンプル中のタンパク質量が>10ugの場合、サンプルのバッファー体系には要求がありません;
2. サンプル中のタンパク質量が<10ugの場合、サンプル準備過程でSDSなどの界面活性剤の使用をできるだけ減らし、塩濃度を低くするよう注意してください;
3. サンプルを提出する際に、サンプルのバッファー体系とサンプル中のタンパク質の推定含量を提供するよう注意してください;
Co-IPサンプル:
1. 洗脱したサンプルをゲルで走査する必要がある場合は、1D SDS PAGEサンプル準備要件に従って準備してください;
2. 洗脱サンプルを直接提出する場合は、HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) バッファー体系を使用してタンパク質を洗脱することをお勧めします。洗脱バッファー体系が後続の質量分析実験と互換性があることを保証します;
サンプル輸送:
1. サンプルを凍結乾燥して輸送することをお勧めします。凍結乾燥サンプル中のタンパク質は非常に安定しています。
2. 液体サンプルはドライアイス輸送を推奨します。短距離輸送では保冷剤も使用できます。

注意事項:質量分析を利用してタンパク質サンプルを同定する際、サンプル準備過程で手袋と帽子を着用し、角質タンパク質(keratin)によるサンプルの汚染をできるだけ避けるようにしてください。

研究事例

このプロジェクトは、中国科学院生物物理研究所のある教授が彼女のCo-IPサンプルを私たちに送ってタンパク質同定を行ったものです。得られた部分結果は以下の図に示されています:
蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定研究案例

タンパク質スポット、バンド、IPサンプルタンパク質同定研究事例


図からわかるように、私たちが提供する結果報告には、同定されたタンパク質のアクセッション番号、ペプチドカバレッジ、同定されたペプチド情報、同定されたペプチドの修飾情報、および同定されたタンパク質の詳細な説明が含まれています。

中/英文プロジェクト報告書:

技術報告書では、BaiTaiPakは詳細な中英文両言語版技術報告書を提供します。報告書には以下が含まれます:

1. 実験手順(中英文)
2. 関連する質量分析パラメータ(中英文)
3. 質量分析画像
4. 原始データ
5. 同定されたタンパク質の詳細情報

タンパク質スポット、バンド、IPサンプル質量分析同定ワンストップサービス

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