質量分析によるペプチド配列同定が完了した後、結果を受け取ったら次にどのように分析すればよいですか?
質量分析でペプチド配列の同定結果を取得した後、次のステップの分析は研究目的(定性、定量、機能研究)に応じて段階的に行う必要があります。一般的なプロセスは以下の通りです。
一、結果の品質管理とフィルタリング
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データベース検索結果のスコア指標(Peptide/Protein FDR、Score、Unique peptide数)を確認します。
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低信頼度のタンパク質や1つのペプチドのみで支持される結果を除去し、データの信頼性を確保します。
二、タンパク質の定性と定量の整理
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同定のみの場合、同定されたタンパク質のリスト、UniProt ID、被覆率などを整理します。
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定量に関わる場合(Label-free、TMTなど)、各サンプルのタンパク質量のマトリックスを集計し、正規化と欠損値の処理を行います。
三、差異分析(グループ比較がある場合)
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統計的検定(t検定、ANOVAなど)を用いて差異タンパク質を選別します。
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通常、Fold Changeと有意性の閾値(例えばFC≥1.5または2、p<0.05)を設定する必要があります。
四、機能注釈と経路の富化
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データベース(GO、KEGG、Reactome)を使用して機能分類を行います。
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富化分析を通じて差異タンパク質の生物学的意義を評価します。
五、さらなるデータ発掘
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タンパク質相互作用ネットワーク(STRING、Cytoscape);
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トランスクリプトーム、メタボロームデータと統合して、調節メカニズムを探ります。
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