SDS-PAGEに基づくタンパク質分離

ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）は、タンパク質の発現分析などの研究作業で頻繁に使用されています。これは、タンパク質サンプルの電気泳動パターンを取得し、他の技術と組み合わせて使用することができます。質量分析に基づくタンパク質同定サービスサンプルの分析または精製を行い、複雑な生物サンプルのタンパク質スペクトル分析に使用します。

百泰派克バイオテクノロジーは、お客様のニーズに応じて、1D SDS-PAGEまたは2D SDS-PAGEに基づくタンパク質分離サービスを提供します。弊社の最適化された標準操作手順に基づき、Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetraゲルシステムを使用して1D SDS-PAGEタンパク質分離を実施します。タンパク質サンプル（5-20 µg）をサンプルバッファーで一定濃度に希釈し、加熱（沸騰水浴5分）します。サンプルの分析目的に応じて適切な濃度のゲルを選択し、サンプルをゲルのウェルにロードします。電気泳動バッファーを追加し、最初は80Vの電圧で定電圧で15分間分離し、その後120Vの電圧で定電圧で60分間分離します。分離後、ゲル板を取り外し、コマッシーブルーまたは銀染色で染色します。
2D SDS-PAGEタンパク質分離は、IPG（pH 3-10）ゲルを使用して一次元等電点電気泳動を行い、SDS-PAGEゲルによる二次元電気泳動で分子量分離を行い、タンパク質を分離します。サンプルはまず超濾過チューブで精製され、溶液システムを2D溶解バッファー（30 mM Tris-HCl、pH 8.8、7 M尿素、2 Mチオ尿素、4% CHAPS含有）に置換して等電点電気泳動を行います。焦点が合ったゲルトリップを上向きに乾燥した厚いフィルターペーパーに置き、余分な水分、ミネラルオイル、および余分なサンプルを絞り出し、バッファーで15分間膨潤させた後、ゲルトリップを平衡バッファーで15分間平衡化します。ゲルトリップをゲルの長いガラス板に上向きに置き、低融点アガロースで封じた後、ゲルを電気泳動槽に移し、低電圧で開始し、サンプルがIPGゲルトリップを完全に抜け、一条の線に濃縮された後、電圧を上げ、ブロモフェノールブルーインジケーターが底部に達したときに電気泳動を停止します。ゲル板を取り外し、コマッシーブルー、銀染色、または蛍光染色で染色します。Typhoon TRIO (GE Healthcare)を使用してゲル画像をスキャンし、Image Quant software (version 6.0, GE Healthcare)およびDeCyder 5.0 (GE Healthcare)で分析します。

百泰派克2D SDS-PAGEの例

サンプルについて：

1. 液体または固体サンプルのいずれでも可;
2. 1D SDS-PAGEには通常2-30 µgのタンパク質が必要で、2D SDS-PAGEには通常50-1000 µgのタンパク質が必要です；
3. コマッシーブルー染色、銀染色、または蛍光染色のタンパク質はいずれも可。