HILIC-UHPLC分析N-糖鎖

糖鎖結合は糖タンパク質の機能にあまり影響を与えないため、通常は特定する必要はありません。しかし、糖タンパク質の糖鎖構造は非常に複雑であり、N-糖の糖鎖結合の構造と位置を評価することは、糖タンパク質の構造を分析する上で役立ちます。5つの一般的なN-糖鎖結合が知られており、最も一般的なのはN-アセチルグルコサミンがアスパラギン（GlcNAcβ1-Asn）と結合するものです。他のアスパラギンに結合するタイプには、哺乳類と古細菌のラミニンにおけるグルコース、古細菌におけるN-アセチルガラクトサミン（GalNAc）、ラミノース素細菌などがあります。また、甘いトウモロコシにおけるアルギニンとのグルコース結合が報告されています。

HILIC-UHPLCによるN-糖鎖結合の分析

N-糖鎖はN-グリコシダーゼF（Peptide N Glycosidase F、PNGase F）の反応によって糖タンパク質から加水分解されます。加水分解されたN-糖鎖は2-アミノベンゾアミド（2-AB）で標識され、様々なエキソ糖苷酶で消化されます。最後に、親水性相互作用クロマトグラフィー（HILIC）を用いた蛍光および質量分析で糖鎖を分析します。

N-糖鎖結合分析の一般的な手順

1. サンプル準備
2. N糖鎖の加水分解
3. 2-AB標識と標識された糖鎖と一連のエキソ糖苷酶の順次反応
4. UPLC-HILIC-FLDに基づく分析
5. さらに、MS/MSフラグメントを使用して糖鎖の詳細な構造を特定できます

エンド糖苷酶の作用：
エンド糖苷酶は糖タンパク質や糖脂質からオリゴ糖を加水分解できます。通常、結合したタンパク質や脂質分子からオリゴ糖を加水分解することはありません。エンド糖苷酶は、ポリマー中の2つの糖単位間の糖鎖結合を破壊することで機能します。
エンド糖苷酶H：低分子マンノースおよび複合型N-糖鎖を加水分解
エンド糖苷酶F：単純な2価N-糖鎖を加水分解

HILIC-UHPLC分析N-糖鎖

N-糖鎖結合分析の一般的な手順

関連サービス