一批サンプルがLoading Bufferに追加されましたが、まだ加熱変性は行われておらず、現在-20℃に保管されています。数週間または1ヶ月後に使用する予定ですが、どのように保存すればよいでしょうか?
ローディングバッファーに加えたが、まだ煮沸して変性されていないタンパク質サンプルについては、長期保存にはタンパク質の安定性とその後の実験の互換性を考慮する必要があります。具体的な提案は以下の通りです:
一、保存条件の推奨
温度:タンパク質の分解とプロテアーゼ活性を最大限に遅らせるため、-80°Cで保存することをお勧めします。
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凍結保存形式:直接チューブで凍結保存可能で、分装は不要ですが、サンプル量が多い場合は、使用量に分割して保存し、凍結融解の繰り返しを避けることをお勧めします。
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注意事項:凍結保存中に反復融解を避けるようにし、SDSを含むローディングバッファーは凍結融解によってSDSが沈殿し、サンプルが均一でなくなり、電気泳動が異常になる可能性があります。
二、使用前の処理の推奨事項
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実験当日に取り出してすぐに煮沸(95–100°C、5分間)します;
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凍結保存後にサンプルにSDSの沈殿や層分離が見られる場合、煮沸前に軽くボルテックスで混合するか、短時間温浴(37–50°C)して溶解させることができます。
三、その他の補足的な提案
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サンプルにプロテアーゼが含まれる場合(プロテアーゼ阻害剤未添加)やタンパク質が比較的不安定なサンプルタイプの場合(組織ライセートなど)、凍結前にプロテアーゼ阻害剤を追加することを検討してください。
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