ファーウェスタンブロット分析

Far-Western Blotは、Western Blot技術に基づく分子生物学的手法で、in vitroでのタンパク質とタンパク質の相互作用を検出するために利用されます。特に、目標タンパク質の天然構造を必要としない相互作用の検出に適しています。

Far-Western Blot技術の全体的なワークフローはWestern Blotに似ていますが、Western Blotでは目標タンパク質の検出に抗体が必要です。一方、Far-Western Blot解析では抗体を使用せず、精製され標識された「餌」タンパク質を使用して膜上の目標タンパク質を検出します。Western BlotとFar-Western Blotの両方で、タンパク質はSDSゲルとnative PAGEゲルを通してサンプルから分離され、その後ゲルから膜にタンパク質を転送します。転写後、BSAでブロッキングします。膜上でタンパク質の変性と復性を行い、その後の検出ステップを行います。Far-Western Blot技術では、市販の高度に精製された餌タンパク質を用いて膜にプローブを標識します。餌タンパク質と目標タンパク質が反応した後、使用した餌タンパク質に応じて目標タンパク質に対応するバンドを検出できます。

特定のタンパク質と相互作用するタンパク質を同定するために、Far-Western Blotは実験コストが低く、感度が高い有効なプラットフォームです。遠western blottingの原理はwestern blottingの改良であり、自然に折り畳まれた再組成タンパク質を最初のプローブとして使用し、PVDF膜に転写されたタンパク質と相互作用します。Far-Western Blotで使用される2番目のプローブは、特定のタンパク質に特異的な抗体であり、酵素標識された3番目のプローブは2番目のプローブに対する抗体です。LC-MS-MSタンパク質同定と組み合わせることで、得られたタンパク斑点（またはタンパクバンド）を特性評価し、タンパク免疫沈降などのさらなる機能解析を行うことができます。

Far-Western Blot分析では、タンパク質の天然構造と天然の相互作用を保持する必要がある場合、以下の問題に注意が必要です：1）変性条件下でSDSゲルで分離されたタンパク質は変性する可能性があり、変性したタンパク質は餌タンパク質と反応しない可能性があります。その結果、相互作用の認識ができないことがあります。2）結合前にタンパク質を変性および復性させると、タンパク質の構造が変化し、目標タンパク質と餌タンパク質の結合に影響を及ぼす可能性があります。3）結合部位が他の要因によって影響されると、餌タンパク質との結合能力を失い、餌タンパク質が反応できなくなることがあります。最も厄介なのは、非天然構造で提示されるタンパク質が新しい非天然の方法で相互作用を起こし、検出が偽陽性になる可能性があることです。

百泰派克生物科技はFar-Western Blot分析サービスを提供しており、お客様のニーズに応じて実験をカスタマイズし、結果に影響を与える可能性のある潜在的な要因を評価します。私たちは提供するデータの信頼性が高く、再現性が高いことをお約束します。

Far-Western Blot分析

Far-Western Blot分析の利点

• in vitroでのタンパク質相互作用研究に利用可能

• タンパク質の結合ドメインを分析

• タンパク質結合の親和性を比較

• 特異的な抗体が不要

Far-Western Blot分析の作業手順

1. タンパク質を定量し、SDSまたはnative PAGEで分離
2. タンパク質をゲルから膜に転送
3. タンパク質を変性および復性し、膜上のタンパク質結合部位を十分に露出させる
4. BSA緩衝液を用いて膜をブロッキング
5. 膜を精製された餌タンパク質とインキュベート
6. 餌タンパク質の信号を検出
7. 画像分析および報告の提出