GSTプルダウンタンパク質相互作用分析

標準的なプルダウン分析には、リコンビナントアフィニティタグを持つ精製タンパク質が必要で、これが「餌」として機能し、タグ特異的アフィニティリガンドに固定されます。次に、別のタンパク質または「獲物」タンパク質を「餌」タンパク質と一緒にインキュベートします。これらの2つのタンパク質が物理的に相互作用すると、「獲物」タンパク質は「餌」タンパク質によって捕獲されます。その後、アフィニティリガンドに応じて、洗脱バッファーを使用して相互作用した「獲物」タンパク質を洗脱することができます。最後に、「獲物」と「餌」タンパク質は、ラウリル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）を介して分離され、その後ゲル染色によってウェスタンブロット法で検出されます。

GSTプルダウン融合タンパク沈降技術は、遺伝子組換えを利用してGSTタグを持つベクターをターゲットタンパク質Aに挿入し、グルタチオンで被覆されたビーズがターゲット融合タンパク質と結合し、細胞溶解液を加えた後、相互作用のあるタンパク質が融合タンパク質に吸着され、過剰なグルタチオンを加えて洗脱されます。洗脱後のサンプルは質量分析法によって分析と同定が行われます。GSTプルダウン融合タンパク質沈降技術のタンパク質相互作用分析は、主に体外での強力または安定したタンパク質間相互作用を研究するために使用されます。既知の2つの興味あるタンパク質間の直接的な相互作用の可能性を特定することができ、ターゲットタンパクと相互作用する可能性のある未知のタンパク質を探すことができます。

タンパク質間相互作用の確認に加えて、GSTプルダウン融合タンパク沈降技術のタンパク相互作用分析法は、タンパク相互作用の条件を特性化するために使用されることもあります。例えば、タンパク質ドメインの切断法を使用してプルダウン法を行うことで、タンパク相互作用にとって重要な機能領域を特定することができます。さらに、GSTプルダウン融合タンパク沈降技術のタンパク相互作用分析法は、目的のタンパク質相互作用のシャペロンを探索するためにも使用され、「餌」タンパクを混合タンパク溶液または細胞/組織抽出物と一緒にインキュベートします。洗浄ステップの後、高スループットの方法で洗脱し、結合したタンパク質を質量分析で同定することができます。

*百泰派克は質量分析に基づいたプルダウンサンプルのタンパク質質量分析同定を提供しています。詳細については：質量分析に基づく相互作用タンパク質質量分析法

プルダウン相互作用タンパク質分析フロー

先進的なオミクス技術サービス企業として、百泰派克バイオテクノロジーは質量分析に基づくタンパク相互作用分析において長年の経験を持っています。百泰派克はタンパク質の発現と精製の効率的な戦略を提供し、プルダウンタンパク相互作用分析のための最適な最適化ソリューションを提供します。私たちは厳格な品質管理と短期間の検査サイクルを特徴としており、百泰派克バイオテクノロジーは貴重な時間と予算を節約するために、遺伝子合成からデータ報告までのプロジェクトの各ステップをカバーするカスタマイズ可能なワンストップサービスを提供しています。
• 遺伝子合成、発現プラスミド構築-餌タンパクの発現、精製および固定化-獲物タンパクの発現と精製-インキュベーション、洗浄および洗脱
• SDS-PAGE、ウェスタンブロットによるタンパク相互作用の同定
• LC-MS質量分析による相互作用タンパクの同定-データ分析-日本語と英語の報告書作成-無料相談

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