SILACと免疫共沈殿質量分析を用いたタンパク質相互作用分析

免疫沈降（Co-Immunoprecipitation、CoIP）は、抗体が特定の抗原を特異的に認識する原理に基づいてタンパク質間相互作用を研究する古典的な手法です。免疫沈降は、生理的状態におけるタンパク質間の相互作用を検証するためによく使用され、質量分析（MS）と組み合わせることで、新しい相互作用タンパク質の同定と発見に利用されます。バイタイパークはSILAC方法により実験群と対照群の細胞をそれぞれ標識した後、Co-IP実験を行い、抗原と抗体の特異的反応に依存して免疫複合体を分離します。次に、LC-MS/MSを用いて免疫複合体中のタンパク質を定性/定量的に検出し、実験群と対照群であるタンパク質の含量が統計学的に有意な差異がある場合、そのタンパク質が研究対象のタンパク質と相互作用していると判定し、タンパク質相互作用の偽陽性結果の可能性を大幅に低減します。SILAC技術とCo-IP-MS技術を組み合わせることで、特定の状況におけるタンパク質相互作用ネットワークの高スループット定量分析に利用できます。
SILACの連携により、元から質の差異を取り入れ、実験システムの誤差を低減し、定量情報が豊富で、精度が高いです。バイタイパークは、Thermo FisherのQ Exactive HF質量分析プラットフォーム、Orbitrap Fusion質量分析プラットフォーム、Orbitrap Fusion Lumos質量分析プラットフォームをNano-LCと組み合わせ、SILACと免疫沈降質量分析を組み合わせたタンパク質相互作用分析サービスパッケージ（SILAC-based CoIP-MS）を提供しています。お客様は実験の目的を教えていただき、細胞をお送りいただくだけで、細胞培養、細胞標識、タンパク質抽出、抗体IP、効率検出、タンパク質切断、ペプチド分離、質量分析、質量分析の生データ分析、生物情報学分析など、プロジェクトの後続のすべての事項を担当いたします。

SILAC-based CoIP-MS実験フロー

Chen, X. L. et al. Proteomics. 2015.

SILAC-based CoIP-MS実験フロー

 

BTP-SILAC-based CoIP-MS 技術の特徴と利点

• タンパク質の構造と翻訳後修飾をできるだけ保持
• タンパク質の相互作用は自然な状態で行われるため、人為的な影響を避けることができます
• 天然状態の相互作用タンパク質複合体を分離できます
• 高スループットで、すべての相互作用タンパク質を迅速かつ包括的に分析可能
• 対照群と比較して非特異的結合タンパク質を識別でき、偽陽性が少ない
• 相互作用タンパク質の相対的な豊度を比較分析できる

SILAC-based CoIP-MS実験プロジェクトのサンプル要件

1. 冷凍保存した細胞をドライアイスで送っていただくだけで、細胞が5回以上継代培養可能な能力を持っていることを保証してください。
2. 細胞を自分で標識し刺激などの処理を完了する必要がある場合は、標識して処理済みの細胞サンプルまたはタンパク質サンプルをドライアイスで送っていただくだけです。各サンプルにつき、少なくとも300 µgのタンパク質総量を保証してください。

注意：サンプル輸送には十分な量のドライアイスを使用し、できるだけ速い配送方法を選んで、輸送中のサンプルの劣化の可能性を低減してください。

中/英語プロジェクト報告書

技術報告書では、バイタイパークが詳細な中英二言語版の技術報告書を提供し、報告書には：

1. 実験手順（中英）
2. 関連する質量分析パラメータ（中英）
3. 同定されたタンパク質の詳細情報
4. 質量分析の画像
5. 生データ
6. 生物情報学分析

SILAC-based CoIP-MSワンストップサービス

注文-サンプル送付のみでOK
バイタイパークのワンストップサービスで、サンプル処理-機器分析-データ分析-プロジェクト報告書を完了します。