絶対定量分析(AQUA)
AQUA絶対定量分析は、標的指向の定量的プロテオミクス技術であり、様々な定量的プロテオミクス研究に広く応用されています。絶対定量戦略は、タンパク質とその修飾状態の絶対定量に使用されます。安定同位体標識の合成ペプチドを内部標準として使用することで、タンパク質の加水分解によって生成される天然ペプチドを模擬することができ、また、共価修飾(例えば、リン酸化、メチル化、アセチル化など)を利用して合成することもできます。選択反応モニタリング分析(SRM)を使用して、タンパク質の加水分解後にAQUA内部標準ペプチドを用いて、タンパク質および翻訳後修飾タンパク質の絶対レベルを精密に定量することができます。
バイオマススペクトロメトリー技術の進歩は、細胞内タンパク質発現レベルの大規模定量分析方法の進歩を促進しました。
絶対定量分析(AQUA)
タンパク質絶対定量戦略はタンパク質定量と翻訳後修飾の有効な検出手段です。安定同位体ラベルを含む合成ポリペプチドを使用して絶対定量を実現:質量スペクトル信号とタンパク質濃度の関係を基に、1モルのタンパク質中の最も強い3つのトリプシンペプチドの平均質量スペクトル信号応答は一定であり、変動係数は10%未満です。任意の内部標準(安定同位体ラベルを含む合成ポリペプチド)を与えるだけで、質量スペクトル信号とタンパク質濃度の関係を利用して一般的な信号応答係数(counts/mol)を測定することができます。測定されたすべてのタンパク質の一般的な信号応答係数は同じです。
絶対定量方法は、合成内部標準ペプチドを使用することに依存しており、このペプチドは消化過程で既知の濃度で細胞裂解液に導入されます。タンデム質量分析計による検出過程では、SRM法を用いて加水分解されたタンパク質サンプルを分析し、天然ペプチドと同位体標識されたAQUA内部標準ペプチドを直接検出および定量することができます。この方法は簡便で敏感であり、タンデム質量分析計の広範な応用と相まって、AQUA絶対定量分析戦略は、細胞裂解物から直接タンパク質レベルと翻訳後修飾を測定する有効な方法となっています。
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