TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白グループ解析
iTRAQ（相対的絶対定量のための同位体標識）とTMT（タンデムマスタグ）技術は、米国のAB Sciex社とThermo Fisher社によってそれぞれ開発されたペプチドの体外標識定量技術です。この2つの技術は、複数（2-10）の安定同位体タグを用いてペプチドのアミノ基を特異的に標識し、タンデム質量分析を行います。これにより、最大10種類の異なるサンプル中のタンパク質の相対量を同時に比較することができ、異なる病理条件下や異なる発育段階における組織サンプル中のタンパク質発現レベルの違いを研究することができます。
継代可能な細胞サンプルについては、SILACの方法で細胞プロテオームの標識プロセスを完了できますが、多くの他の研究システム、例えば組織サンプルや継代培養ができない細胞に対しては、定量的なプロテオミクス分析を完了するために他の標識方法が必要です。TMT、iTRAQなどの体外（in vitro）標識に基づく定量方法が登場しました。
iTRAQタグは以下の3つの部分から構成されています：
1. レポートグループ（reporter group）：タンパク質サンプルの豊度レベルを示します。
2. バランスグループ（balance group）：レポートグループの質量差を均衡させ、等重タグの重量を一致させ、同じペプチドのm/zを保証します。
3. ペプチド反応グループ（amine-specific reactive group）：ペプチドのN末端およびリジン側鎖のアミノ基と共有結合し、ペプチドを標識します。
iTRAQとTMTタグの構造図
異なるサンプルからの同じペプチドは、TMT/iTRAQ試薬によって標識された後、同じ質量数を持ち、一次質量分析（MS1）で同じ質量ピークとして現れます。この質量ピークが選定されて破壊されると、二次質量分析（MS2）で異なるレポートグループが放出されます。それぞれの質量ピークの信号強度は、異なるサンプルからのそのペプチドとその対応するタンパク質の発現量の高さを示します。TMT/iTRAQ定量プロテオミクス研究は、その測定精度の高さと適応サンプルの種類の多さから、現在広く使用されています。百泰派克は、伝統的なTMT/iTRAQ分析技術に基づいて、TMT/iTRAQ/MultiNotch MS分析技術を提供し、三級破片報告イオンを使用して定量を行い、TMT/iTRAQ定量プロテオミクス分析の精度をさらに高め、定量の正確性を向上させることができます。
百泰派克は、Thermo FisherのQ ExactiveHF質量分析プラットフォーム、Orbitrap Fusio Lumos質量分析プラットフォームをNano-LCと組み合わせて、TMT/iTRAQ/MultiNotch MSに基づく定量プロテオーム分析サービス技術パッケージを提供しています。あなたは実験の目的を教えていただき、タンパク質を郵送していただければ、私たちが後続のプロジェクトのすべてを担当し、タンパク質の酵素切断、ペプチドの標識、ペプチドの分離、質量分析、質量分析の元データ分析、生物情報学分析を行います。
iTRAQ/TMT定量プロテオーム分析実験の流れ
iTRAQ 8-plex定量プロテオーム分析の流れ
iTRAQ/TMT定量プロテオーム分析技術の特徴
• 高スループット定量タンパク質分析：10個のサンプルを同時に分析可能；大量の臨床サンプル、多対照群の大規模実験分析に適し、新しいバイオマーカーを発見
• 体外標識、組織、細胞、血液など多様なサンプルの分析に適しています
• 質量分析の感度が高く、低豊度タンパク質の検出が可能で、タンパク質の相対豊度を広範囲に比較できます
• リッチなリン酸化などの修飾ペプチドの方法と組み合わせて、翻訳後修飾の変化をより正確に研究できます
iTRAQ/TMT定量プロテオーム分析のサンプル要件
| サンプルタイプ | タンパク質 | 細胞サンプル | 動物組織 | 植物組織 |
血液 （EDTA抗凝固剤） |
血清 | 尿 | 酵母、微生物サンプル |
| サンプル量 | 100 ug | 1X10⁷個の細胞 | 1g | 200 mg | 1 mL | 0.2-0.5 mL | 2 mL |
乾燥重量200mg |
TMT-iTRAQ-MultiNotch定量プロテオーム分析のサンプル要件
注意：サンプルの輸送には十分な量のドライアイスを使用し、できるだけ迅速な配送方法を選択してください。輸送中のサンプルの劣化の可能性を低くするためです。
中/英語のプロジェクトレポート
技術レポートでは、百泰派克生物科技が詳細な中英二言語版の技術レポートを提供します。レポートには以下が含まれます：
1. 実験手順（中英）
2. 関連する質量分析パラメータ（中英）
3. 質量分析の画像
4. 元データ
5. タンパク質差異レベルの分析
6. 生物情報学分析
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